ABSTRACT
@#[摘 要] 目的：通过生物信息学手段筛选乳腺癌中差异表达的关键miRNA及其靶基因，干预其在乳腺癌细胞中的表达并观察对乳腺癌细胞功能的影响。方法：利用GEO数据库筛选在乳腺癌中差异表达的miRNA，ENCORI数据库验证差异miRNA的表达，以选定最显著的差异表达miRNA为研究对象；利用Starbase、miRDB和miRWalk数据库预测miR-32-5p的靶基因，利用DAVID数据库对靶基因进行GO分析和KEGG分析，利用String数据库联合Cytoscape3.6.2软件进行PPI网络分析及核心基因的筛选，从核心基因中选择相互联系紧密“度值”最显著的Dickkopf相关蛋白3（DDK3）基因进行后续实验。qPCR检测miR-32-5p在人正常乳腺细胞 MCF10A和人乳腺癌细胞MCF7、MDA-MB-231、MDA-MB-453细胞中的表达。向MDA-MB-231细胞中转染miR-32-5p mimic、miR-32-5p inhibitor及各自的对照（NC）序列，分别用CCK-8法、流式细胞术和Transwell实验检测过表达或抑制miR-32-5p对细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。结果：从GEO数据库中获取的两个数据集共识别出两个差异miRNA，ENCORI数据库验证差异miRNA的表达发现miR-32-5p的表达水平与GEO数据库的结果一致，故选择其进行研究；预测得到198个miR-32-5p潜在的靶基因并鉴定出10个核心基因（DKK3、WNT2B、SFRP5、SFRP2、SFRP1、LRP6、WNT6、KREMEN1、NEDD4L、TRIP12），其中DKK3的度值最大可能在乳腺癌中较为重要，于是选择miR-32-5p/DKK3轴进行后续研究。miR-32-5p在3种乳腺癌细胞中的表达水平显著高于正常乳腺细胞（均P<0.01），其中以MDA-MB-231细胞中表达最高。双荧光素酶基因报告实验验证了miR-32-5p与DKK3基因的靶向结合及其对后者表达的负向调控。转染miR-32-5p mimic、miR-32-5p inhibitor后成功提高或抑制了MDA-MB-231细胞中miR-32-5p的表达。与对照组相比，过表达miR-32-5p可抑制MDA-MB-231细胞的凋亡而促进细胞增殖和侵袭（P<0.05或P<0.01），敲低miR-32-5p则起相反的作用（均P<0.01）。结论：miR-32-5p/DKK3轴可能是影响乳腺癌发生发展的关键通路，过表达miR-32-5p能够抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡而促进细胞增殖和侵袭。